Characterization of novel porins from Protochlamydia amoebophila UWE25

TL;DR: Auf Studien der Ausenmembrankomponenten von klinischen Chlamydien wurde pc1489 dem „late gene“ Cluster zugeordnet, dessen Mitglieder vor allem zu spateren Zeitpunkten des Entwicklungszyklus grose Wichtigkeit zugesprochen wird.

Abstract: Das Phylum Chlamydiae beinhaltet einige wichtige bakterielle Krankheitserreger, die sich durch eine obligat intrazellulare Lebensweise und einen charakteristischen Lebenszyklus auszeichnen. Eine kritische Phase stellt dabei das Eintreten des Bakteriums in die eukaryotische Wirtszelle dar, bei der Ausenmembranproteinen eine wichtige Rolle spielen. In P. amoebophila wurde eine Porin-Familie entdeckt, deren Mitglieder - pc0870, pc1077, pc1489 und pc1860 - moglicherweise die Funktion des „major outer membrane protein“ (MOMP) der klinischen Chlamydien ersetzen konnten. E. coli wurde als geeignetes Modelsystem herangezogen, um die vier potentiellen Porine heterolog zu exprimieren. Als Ergebnis konnte die Uberexpression von allen vier Porin-Kandidaten mittels SDS-PAGE und Western Blot Analyse detektiert werden. Messungen der optischen Dichte wahrend heterologer Expression konnten jedoch nicht zeigen, dass die Porine Kanale in der Ausenmembran bilden und somit letale Auswirkungen auf die Wirtszelle haben. Weiters wurde die Produktion von Antikorpern als geeignete Methode gewahlt, um die Lokalisierung des Porins pc1077 in der Ausenmembran von P. amoebophila zu zeigen. Das Transkriptionsprofil von pc1489 wurde mittels qPCR untersucht. Basierend auf Studien der Ausenmembrankomponenten von klinischen Chlamydien wurde pc1489 dem „late gene“ Cluster zugeordnet, dessen Mitglieder vor allem zu spateren Zeitpunkten des Entwicklungszyklus grose Wichtigkeit zugesprochen wird. Auserdem wurde ein neuer Standardantikorper generiert, um mit Immunfluoreszenz Zellpermeabilitat zu demonstrieren. Das cytoplasmatische Protein Dnak wurde erfolgreich in E. coli uberexprimiert und spezifische Antikorper wurden generiert. Die Spezifitat dieser Antikorper konnte mittels Immunfluoreszenz visualisiert und durch Western Blot Analysen bestatigt werden. Auserdem detektiert der Standardantikorper gegen DnaK von P. amoebophila erfolgreich homologe Proteine in Waddlia chondrophila und Simkania negevensis.